Главная страница
Поиск по модели:
  
Стих не судите люди
Во сколько закрывается метро выборгская
Какие масла очищают кожу
Вязание крючком болеро для детей схемы
Как вести домовую книгу расходов образец
Война и мир семья болконских характеристика
Расписание поездов орехово зуево москва
Виниловые наклейки на авто пермь
 

Тест системы для выявления гепатита - иммуноферментная тест-система для определения поверхностного антигена вируса гепатита в и способ определения поверхностного антигена вирусного гепатита в

Изобретение относится к области иммунологии, медицины и биотехнологии. Иммуноферментная тест-система для идентификации HBsAg в сыворотке плазме и препаратах крови альбумине, фибринолизине, иммуноглобулинах и лейкоцитарном интерфероне содержит: Предложен также способ определения поверхностного антигена вирусного гепатита В HBsAg методом иммуноферментного анализа в биологическом образце с помощью данной тест-системы.

Для диагностики гепатита В с помощью специфических тестов решающее значение имеет обнаружение в сыворотке крови поверхностного антигена вируса гепатита В - HBsAg, являющегося основным маркером заболевания, который регистрируется задолго до появления клинических признаков болезни.

Всеобщая вакцинация ускорила накопление мутантных форм вируса гепатита В. Наличие мутаций в вирусном геноме вызывает изменение структуры антигенных эпигонов HBsAg или биологических свойств вируса, например снижение секреции вируса из клеток.

Вследствие этого снижается выявляемость HBsAg с помощью сертифицированных диагностических тестов [Weinberger K. Установлено, что при сочетанном инфицировании вирусами гепатитов В и С или вирусом гепатита В и ВИЧ происходит подавление репликации вируса гепатита В. Это приводит к тому, что количество HBsAg в сыворотке крови ниже предела чувствительности большинства используемых тест-систем, разрешенных к применению [Berger A.

Современные методы выявления HBsAg позволяют обнаруживать его в низких концентрациях. Существуют национальные критерии чувствительности и специфичности отечественных препаратов. Одним из путей повышения чувствительности детекции HBsAg в иммуноферментном анализе может быть использование иммунохимического комплекса биотин-стрептавидин.

При синтезе конъюгата антитело-биотин с одной молекулой антитела может быть связано до 90 молекул биотина. Молекула стрептавидина имеет 4 центра связывания биотина, поэтому каждый специфический иммунохимический комплекс на конечной стадии будет содержать не одну молекулу фермента, а несколько десятков. Использование для биотинилирования длинного спейсера значительно снижает стерические препятствия при взаимодействии меченных биотином антител со стрептавидином.

На первом этапе HBsAg, содержащийся в тестируемом образце, одновременно связывается с овечьими поликлональными антителами к HBsAg, сорбированными в лунки планшета, и с конъюгатом-1, являющимся мышиными моноклональными антителами к HBsAg, связанными с биотином. На втором этапе после отмывки не связавшихся реагентов конъюгат-2 стрептавидин, меченный пероксидазой хрена взаимодействует с конъюгатом После отмывки не прореагировавших реагентов ферментативная активность связавшегося конъюгата-2 детектируется окрашенным продуктом взаимодействия фермента со смесью субстрата и хромогена.

Интенсивность окрашивания пропорциональна концентрации HBsAg в исследуемом образце. Общее время реакции составляет мин. Тест-система для определения поверхностного антигена вирусного гепатита В HBsAg методом иммуноферментного анализа в биологическом образце содержит:. В набор включены нейтрализующий реагент, жидкий или лиофилизированный, представляющий собой иммуноглобулины козы, содержащие антитела к HBs-антигену; контрольный реагент, жидкий или лиофилизированный, представляющий собой иммуноглобулины козы, не содержащие антитела к HBs-антигену для подтверждения поверхностного антигена HBsAg.

В качестве биологического материала может быть исследована сыворотка или плазма крови, препарат крови, например, выбранный из группы: Данное техническое решение отличается от известных наличием фазы одновременного совместного выдерживания в лунке исследуемого образца с конъюгатами-1 и Для выявления поверхностного антигена гепатита В в сыворотке плазме и препаратах крови альбумине, фибринолизине, иммуноглобулинах и лейкоцитарном интерфероне предназначен набор 1 "ДС-ИФА-HBsAg-0,01".

Содержимое флакона растворить физиологическим раствором в объеме, указанном на этикетке флакона, осторожно перемешать и выдержать до использования мин. Промывочный рабочий раствор - для промывания иммуносорбента. Содержимое флакона с концентратом ПР разводят в 25 раз дистиллированной водой. Полученный раствор тщательно перемешивают. При использовании целого планшета к 5,0 мл раствора для разведения концентрата конъюгата-1 добавляют 0,5 мл концентрата конъюгата-1 и осторожно перемешивают.

При использовании целого планшета к 5,0 мл раствора для разведения концентрата конъюгата-2 добавляют 0,5 мл концентрата конъюгата-2 и осторожно перемешивают. Срок годности рабочих растворов конъюгатов - не более 30 мин в защищенном от света месте.

Гепатит В: подготовка к обследованию, диагностика и виды анализов

Во избежание конденсации влаги внутри лунок необходимо выдержать иммуносорбент при комнатной температуре в закрытом пакете не менее 30 минут. Перед использованием комплектов 3 и 4 необходимо вскрыть фольгированный пакет с иммуносорбентом. Вынуть из пакета рамку и необходимое количество стрипов.

Пакет с неиспользованными стрипами тщательно герметизировать, не удаляя осушитель. Перед использованием иммуносорбент любого комплекта промыть 3 раза рабочим раствором ПР, заливая его до краев лунок от до мкл в лункуне допуская при этом переливания промывочного раствора через края лунок, выдержать 40 с и удалить промывочный раствор в емкость для сбора инфицированного материала.

Затем в лунки планшета с сорбированными моноклональными антителами к HBsAg вносят по мкл контрольных исследуемых образцов. Затем, не удаляя содержимое лунок и не промывая планшет, во все лунки стрипов вносят по 50 мкл рабочего раствора конъюгата-1, окрашенного в зеленый цвет.

При этом содержимое лунок изменяет свой цвет на серый. В случае тестирования плазмы или сыворотки, имеющих кислый рН, раствор в лунках становится ярко-желтым.

При добавлении конъюгата-1 не следует допускать случайного заноса образца из одного стрипа в другой через наконечники. Затем, не удаляя содержимое лунок и не промывая планшет, во все лунки стрипов вносят по 50 мкл рабочего раствора конъюгата-2, окрашенного в желтый цвет. При добавлении конъюгата-2 не следует допускать случайного заноса образца из одного стрипа в другой через наконечники. Далее содержимое лунок удаляют в емкость для сбора инфицированного материала и планшет промывают 7 раз рабочим промывочным раствором.

Реакцию останавливают добавлением во все лунки планшета по 50 мкл стоп-реагента и через мин проводят учет результатов ИФА. Учет результатов проводят спектрофотометрически при двух длинах волн: Допустим учет результатов при одной длине волны нм.

Если одно из значений ОП К- выходит за этот предел, его следует исключить из расчета среднего значения. Если исключению подлежат более одного значения ОП К- анализ следует повторить. Реакцию считают положительной, если значение ОП в лунке с образцом равно или превышает значение ОП критическое ОП крит. Общее время постановки ИФА составляет мин. При постановке иммуноферментного анализа на шейкере контрольные исследуемые образцы вносят по мкл вместе с рабочим раствором конъюгата-1 в количестве 50 мкл.

Затем, не удаляя содержимое лунок и не промывая планшет, во все лунки стрипов вносят по 50 мкл рабочего раствора конъюгата В дополнение к реагентам, включенным в состав набора 1, в состав набора 2 включены АНТИ-HBs-ПЛЮС нейтрализующий реагент - жидкий или лиофилизированный, иммуноглобулины козы, содержащие антитела к HBs-антигену; АНТИ-HBs-МИНУС контрольный реагент - жидкий или лиофилизированный, иммуноглобулины козы, не содержащие антитела к HBs-антигену.

Приказ управления здравоохранения администрации Липецкой обл. от 20.01.2003 N 24, ЦГСЭН в Липецкой области от 14.01.2003 N 4-пв "О применении в практике здравоохранения иммуноферментных тест - систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита в (HBsAg) и антител к вирусу гепатита с (анти-ВГС) в сыворотке крови человека"

Лиофилизированное содержимое флаконов растворяют дистиллированной водой в объеме, указанном на этикетке. При постановке ИФА контрольные образцы и образцы, подлежащие подтверждению, внести каждый в две лунки по мкл. В первые лунки с контрольными и подтверждаемыми образцами добавить по 25 мкл контрольного реагента - АНТИ-HBs-МИНУС, во вторые - по 25 мкл нейтрализующего реагента - АНТИ-HBs-ПЛЮС.

Дальнейшее проведение ИФА, а также постановка на шейкере осуществляется аналогично, как описано выше при использовании набора 1. Допустим учет результатов при одной длине волны - нм. Реакцию следует учитывать, если среднее значение ОП в лунках с К- без добавления контрольного или нейтрализующего реагентов ОП К- ср. Значения ОП К- после добавления нейтрализующего и контрольного реагентов должны быть ниже значения ОП критического ОП крит.

Реакцию считают положительной, если значение ОП в лунке с образцом равно или превышает ОП крит. В этом случае присутствие в образце HBsAg следует считать доказанным и дальнейшая проверка не требуется.

Полученные данные представлены в таблице 1. Полученные данные приведены в таблице 3.

Диагностика гепатита C, экспресс тест и лабораторные анализы

BBIWest Bridgewater, Mass. Новый тест с идентичной чувствительностью выявляет HBsAg субтипов ad и ay со значительным преимуществом относительно теста сравнения - системы Abbott Auszyme EIA HBsAg V2. HBVа в двух случаях ZeptoMetrix Corporation Cat.

HBV опережает время 1-ой детекции ДНК. Известно, что существует проблема выявления HBsAg при коинфицировании. Было проанализировано образца сыворотки крови анти-ВИЧ-позитивных лиц.

Причем 7 из них содержали антитела к HBcore-антигену, а 9 образцов не имели никаких других маркеров, кроме HBsAg, детектируемого только в системе с высокой чувствительностью таблица 5. Следовательно, повышение чувствительности тестов для выявления HBsAg позволит снизить количество случаев скрытого гепатита В как с наличием дополнительного маркера анти-НВс, так и при отсутствии любых маркеров.

За счет повышенной чувствительности нового теста мутантные варианты HBsAg показывают более высокую реактивность в сравнении с другими системами таблица 6. Всего протестировано образцов. Была изучена возможность использования нового теста для детекции HBsAg в препаратах крови.

В ходе исследований анализировался широкий спектр препаратов крови разных фирм-производителей: Жидкие препараты крови используют неразведенными; лиофильно высушенные препараты крови перед исследованием в тест-системе разводят в соответствии с инструкцией по применению данного препарата. Специфичность тест-системы по отношению к препаратам крови были взяты пять разных серий препаратов была исследована на трех экспериментально-производственных сериях тест-системы таблица 8. Из данных таблицы видно, что значения ОП всех препаратов были ниже ОП крит.

Способ определения поверхностного антигена вирусного гепатита В HBsAg методом иммуноферментного анализа в биологическом образце с помощью тест-системы по п. Бурков Анатолий Николаевич RUУланова Татьяна Ивановна RUОбрядина Анна Петровна RUЕгорова Наталия Игоревна RUИголкина Светлана Николаевна RUШарипова Ирина Николаевна RU Патентообладатель и: Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Диагностические системы" RU Приоритеты: Изобретение относится к области медицины, иммунологии и биотехнологии.

Тест-система для определения поверхностного антигена вирусного гепатита В HBsAg методом иммуноферментного анализа в биологическом образце содержит: Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1 Для выявления поверхностного антигена гепатита В в сыворотке плазме и препаратах крови альбумине, фибринолизине, иммуноглобулинах и лейкоцитарном интерфероне предназначен набор 1 "ДС-ИФА-HBsAg-0,01".

Реагенты, включенные в состав набора 1: Общее время постановки ИФА при использовании шейкера составляет 85 мин. Интерпретация результатов Образец считают содержащим HBsAg, если а ОПк ОП крит. Патентный поиск по классам МПК Терминология и общие сведения Как получить патент на изобретение Роспатент - методические рекомендации Международная патентная классификация.

Бурков Анатолий Николаевич RUУланова Татьяна Ивановна RUОбрядина Анна Петровна RUЕгорова Наталия Игоревна RUИголкина Светлана Николаевна RUШарипова Ирина Николаевна RU. Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Диагностические системы" RU. Больные с различными инфекционными заболеваниями, не связанными с вирусным гепатитом В.



 
00769
В освоении новой техники Вы поступаете так:
изучаете инструкцию
просите кого-нибудь помочь
полагаетесь на интуицию
© 2005 — 2016 «cs.sc-nix.ru» Документы на все случаи!